亚洲免费观看视频_69国产精品久久久久久人妻_亚洲色噜噜狠狠网站色_日韩少妇人妻vs中文字幕_亚洲最新无码成av人_制服丝袜在线亚洲欧美老师_亚洲国产成在人网站天堂_亚洲 欧洲 日韩 综合av_97se亚洲国产综合自在线不卡_欧美日本无码一区二区三区

采用(yong)實時熒光(guang)PCR技術(shu)，針對(dui)李斯(si)特(te)菌屬特(te)異性基(ji)因設計引(yin)物和探針。PCR擴(kuo)(kuo)增(zeng)過(guo)程中，與模板結合的探針被Taq酶分解(jie)產(chan)生熒光(guang)信號，熒光(guang)定量PCR儀根據(ju)檢測到的熒光(guang)信號繪制出(chu)實時擴(kuo)(kuo)增(zeng)曲線，從而實現(xian)李斯(si)特(te)菌屬在核酸(suan)水平(ping)上的定性檢測。

1、核酸提取(qu)????????

1）取40μL增菌液(ye)于裂解(jie)液(ye)管中(zhong)，98℃或(huo)沸水浴10min。

2）冷卻至室(shi)溫，吸取上清備用或者置(zhi)于-20℃保存。

2、反應體系配置

從試(shi)劑盒中取(qu)(qu)出(chu)List預混液，充分(fen)融化，渦旋后(hou)(hou)短(duan)暫(zan)離心(xin)，然后(hou)(hou)將陰性(xing)對照、樣(yang)品的(de)DNA提取(qu)(qu)液、陽性(xing)對照各(ge)取(qu)(qu)5μL分(fen)別加入PCR管(guan)或(huo)PCR板(ban)中，蓋好管(guan)蓋或(huo)板(ban)膜，短(duan)暫(zan)離心(xin)，立即進行PCR擴增反應。

3、PCR擴增???????

PCR管或PCR板(ban)置(zhi)于PCR儀(yi)上，推薦反應程(cheng)序設定如下：反應體系為25μL，在第二(er)步每個循環60℃時檢測(ce)熒(ying)光(guang)信號，檢測(ce)通(tong)道選(xuan)擇(ze)CY5。

注(zhu)：使用(yong)ABI系列PCR儀器，如果不添加ROX，“passive reference”和(he) “quencher”均選擇(ze)“none”。