硝基(ji)(ji)呋(fu)喃(nan)(nan)(nan)(nan)類藥(yao)(yao)物(wu)是一種(zhong)抗生素,對(dui)大(da)多數(shu)革蘭(lan)氏(shi)(shi)陽性(xing)(xing)菌(jun)(jun)(jun)和(he)革蘭(lan)氏(shi)(shi)陰性(xing)(xing)菌(jun)(jun)(jun)等(deng)病(bing)原(yuan)(yuan)體均有(you)殺滅作(zuo)用。硝基(ji)(ji)呋(fu)喃(nan)(nan)(nan)(nan)類藥(yao)(yao)物(wu)因為(wei)價格較低且效果好,被廣泛應用于畜(chu)禽及水產養殖業,以治療(liao)由(you)(you)大(da)腸桿菌(jun)(jun)(jun)或沙門氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)所引起的(de)腸炎(yan)、疥瘡(chuang)、赤鰭病(bing)、潰瘍病(bing)等(deng)。由(you)(you)于硝基(ji)(ji)呋(fu)喃(nan)(nan)(nan)(nan)類藥(yao)(yao)物(wu)及其代謝(xie)物(wu)對(dui)人體有(you)致癌、致畸胎的(de)副作(zuo)用,中(zhong)(zhong)華人民共和(he)國農業部將硝基(ji)(ji)呋(fu)喃(nan)(nan)(nan)(nan)類藥(yao)(yao)物(wu)列(lie)為(wei)在飼養過程(cheng)中(zhong)(zhong)禁(jin)止使用的(de)藥(yao)(yao)物(wu),在動物(wu)性(xing)(xing)食品中(zhong)(zhong)不得檢(jian)出。硝基(ji)(ji)呋(fu)喃(nan)(nan)(nan)(nan)類原(yuan)(yuan)型(xing)藥(yao)(yao)在生物(wu)體內代謝(xie)迅速,其代謝(xie)產物(wu)分別(bie)為(wei)AOZ、AMOZ、AHD、SEM,和(he)蛋白質結合而相當穩(wen)定,故常利用代謝(xie)物(wu)的(de)檢(jian)測來反應硝基(ji)(ji)呋(fu)喃(nan)(nan)(nan)(nan)類藥(yao)(yao)物(wu)的(de)殘留狀(zhuang)況。
本試劑(ji)盒是應用ELISA技(ji)術(shu)研(yan)發(fa)的藥物殘(can)留檢測產品,與儀器分析技(ji)術(shu)相(xiang)比具有快速、簡(jian)便、靈敏度高等優點,能減少工作強度。
1、將所(suo)需試劑從冷藏(zang)環境中取出,置于室(shi)溫(wen)(20~25℃)平衡30min以上,注(zhu)意(yi)每種(zhong)液(ye)體試劑使用前均須搖(yao)勻。
2、取出需(xu)要數量(liang)的(de)微(wei)孔板,將不用(yong)的(de)微(wei)孔板放進原錫箔袋中并(bing)且與提供的(de)干燥劑一起重新密封(feng),保存于2~8℃。切勿冷凍。
3、洗滌液【配液1】在使(shi)用前也需回溫。
4、編(bian)號(hao):將樣本(ben)和標準(zhun)品(pin)對應微(wei)孔按序編(bian)號(hao),每個樣本(ben)和標準(zhun)品(pin)做2孔平行,并(bing)記錄(lu)標準(zhun)孔和樣本(ben)孔所在的位置。
5、加標準品(pin)/樣本:加標準品(pin)或樣本50μL/孔到對(dui)應的微孔中,再加入呋喃(nan)西林代(dai)謝(xie)物(wu)(wu)酶(mei)標物(wu)(wu)50μL/孔,然后再加入呋喃(nan)西林代(dai)謝(xie)物(wu)(wu)抗(kang)試劑50μL/孔輕(qing)輕(qing)振蕩混勻,用蓋(gai)板(ban)膜(mo)蓋(gai)板(ban)后置于25℃避光環境中反應30min。
6、洗(xi)板:小心揭(jie)開蓋板膜,將孔(kong)內液體甩干,用洗(xi)滌液【配液1】250μL/孔(kong),充分洗(xi)滌4~5次(ci),每次(ci)間隔10s,用吸水紙(zhi)拍干(拍干后未被(bei)清除(chu)的(de)(de)氣泡可(ke)用未使用過的(de)(de)槍頭(tou)戳破)。
7、顯色(se):加(jia)入(ru)底(di)物(wu)(wu)液A液50μL/孔(kong)(kong),再加(jia)底(di)物(wu)(wu)液B液50μL/孔(kong)(kong),輕(qing)輕(qing)振蕩混勻,用蓋(gai)板膜蓋(gai)板后置(zhi)于25℃避光環境中反應(ying)15min。
8、測(ce)定(ding):加(jia)入(ru)終(zhong)止液(ye)50μL/孔(kong),輕輕振蕩混勻(yun),設定(ding)酶標(biao)儀于450nm處(建(jian)議用雙波長450/630nm檢測(ce),請在5min內讀完數(shu)據),測(ce)定(ding)每(mei)孔(kong)OD值(若(ruo)無酶標(biao)儀,則不加(jia)終(zhong)止液(ye)用目測(ce)法可進(jin)行判定(ding))。