本試(shi)劑(ji)盒(he)是應用ELISA技術(shu)研發而成的檢測產品，具有(you)快速、簡便、準確和靈敏度高(gao)等優點(dian)，操作(zuo)時間需45min，能減少操作(zuo)誤差和工作(zuo)強度。
1、將所需試(shi)劑(ji)從冷(leng)藏環境中取(qu)出(chu)(chu)，置于室溫（20~25℃）平(ping)衡30min以(yi)上，注意每種(zhong)液體試(shi)劑(ji)使(shi)用(yong)前均須搖勻。若試(shi)劑(ji)中有晶體析出(chu)(chu)，回溫溶解后方可使(shi)用(yong)。
2、取出需要數量的(de)微孔(kong)板，將不用的(de)微孔(kong)放(fang)入錫(xi)箔(bo)袋，保存于2~8℃。
3、洗滌液【配液1】在使用(yong)前也需回溫。
4、編號：將樣(yang)(yang)本(ben)和標準(zhun)品對應(ying)微孔按(an)序編號，每個(ge)樣(yang)(yang)本(ben)和標準(zhun)品做2孔平行(xing)，并(bing)記錄(lu)標準(zhun)孔和樣(yang)(yang)本(ben)孔所在的位置。
5、加標準品(pin)/樣本：加標準品(pin)或(huo)樣本100μL/孔(kong)到(dao)對應的微孔(kong)中，然后加入(ru)四(si)(si)環(huan)素類酶標物50μL/孔(kong)，再加入(ru)四(si)(si)環(huan)素類抗試劑50μL/孔(kong)，輕輕振蕩混勻，用(yong)蓋板膜蓋板后置于25℃避光環(huan)境(jing)中反應30min。
6、洗板(ban)：小心揭開蓋(gai)板(ban)膜，將孔(kong)內液(ye)體甩干，用(yong)(yong)洗滌液(ye)【配(pei)液(ye)1】250μL/孔(kong)，充分洗滌4~5次，每次間隔10s，用(yong)(yong)吸(xi)水紙拍干（拍干后(hou)未被清除的(de)氣泡可用(yong)(yong)未使用(yong)(yong)過的(de)槍(qiang)頭戳破(po)）。
7、顯色：加入底物液(ye)(ye)A液(ye)(ye)50μL/孔，再加底物液(ye)(ye)B液(ye)(ye)50μL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板(ban)膜蓋板(ban)后置于25℃避光環(huan)境(jing)反應(ying)15min。
8、測(ce)定：加入(ru)終止液50μL/孔，輕輕振蕩混勻(yun)，設定酶標儀于450nm處（建(jian)議用(yong)雙波長450/630nm檢測(ce)，請在(zai)5min內讀完(wan)數據），測(ce)定每孔OD值。（若(ruo)無酶標儀，則(ze)不加終止液用(yong)目測(ce)法(fa)可進行判定）。
