鏈霉(mei)(mei)素(su)(su)(su)(Streptomycin,STR)是一(yi)種氨(an)基糖苷類抗生素(su)(su)(su),如果使用不當或停藥(yao)時間短,鏈霉(mei)(mei)素(su)(su)(su)可能會(hui)超(chao)量(liang)殘留于動物源食品(pin)中。食品(pin)中低濃(nong)度(du)鏈霉(mei)(mei)素(su)(su)(su)殘留會(hui)引(yin)起(qi)過敏,損(sun)傷腸(chang)內有(you)益菌群,而高(gao)濃(nong)度(du)鏈霉(mei)(mei)素(su)(su)(su)會(hui)引(yin)起(qi)耳(er)和腎中毒,對過敏胎兒更為嚴重(zhong)。過去鏈霉(mei)(mei)素(su)(su)(su)殘留一(yi)般采用氣相(xiang)色譜法測定(ding),但此方法昂貴又費時,本試劑(ji)盒是應(ying)用ELISA技(ji)術研發的藥(yao)物殘留檢測產(chan)品(pin),與儀器分(fen)析(xi)技(ji)術相(xiang)比具有(you)快速、簡便、準確(que)和靈敏度(du)高(gao)等優(you)點,操作時間需45分(fen)鐘,能減(jian)少(shao)工作強(qiang)度(du)和操作誤差。
1、將所需試劑(ji)從冷藏環(huan)境(jing)中取出,置(zhi)于(yu)室溫(wen)(20~25℃)平衡(heng)30min以上(shang),注意每種(zhong)液體試劑(ji)使用前均須搖勻。
2、取(qu)出需要數量(liang)的微(wei)孔(kong)板,將不用的微(wei)孔(kong)板放進原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新(xin)密封,保存于2~8℃。切勿冷凍。
3、洗滌液在使用前(qian)也需回溫。
4、編號:將(jiang)樣(yang)本和(he)標準品(pin)對應微孔(kong)按(an)序編號,每個樣(yang)本和(he)標準品(pin)做2孔(kong)平行(xing),并記(ji)錄標準孔(kong)和(he)樣(yang)本孔(kong)所在的位置。
5、加(jia)標準品/樣本:加(jia)入(ru)標準品或樣本100μL/孔(kong)(kong)到對應的微孔(kong)(kong)中(zhong),再(zai)加(jia)入(ru)鏈霉素(su)酶(mei)標物50μL/孔(kong)(kong),再(zai)加(jia)入(ru)鏈霉素(su)抗(kang)試(shi)劑50μL/孔(kong)(kong)輕輕振蕩(dang)混勻,用蓋(gai)板膜蓋(gai)板后置于25℃避光環境中(zhong)反(fan)應30min。
6、洗(xi)(xi)板:小心揭開(kai)蓋板膜,將(jiang)孔(kong)內液體甩干,用洗(xi)(xi)滌(di)液250μL/孔(kong),充(chong)分洗(xi)(xi)滌(di)4~5次,每次間隔10s,在吸水紙上拍干(拍干后未被(bei)清除的氣泡可用未使用過(guo)的槍頭(tou)戳破)。
7、顯色:加(jia)入底物液A液50μL/孔,再加(jia)入底物液B液50μL/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋(gai)板膜蓋(gai)板后(hou)置于25℃避光(guang)環境中反應15min。
8、測定:加入終止液50μL/孔(kong),輕(qing)輕(qing)振(zhen)蕩混勻,設定酶(mei)標(biao)儀于(yu)450nm處(建議用(yong)雙波長450/630nm檢測,請在5min內讀完數據),測定每孔(kong)OD值(若無酶(mei)標(biao)儀,則不(bu)加終止液用(yong)目(mu)測法可進(jin)行判定)。