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一、實驗前準備

1. 試劑準備：

   將所需試劑從冷藏環境中取出，置于室溫（20～25°C）平衡30min以上，確保試劑溫度穩定。

   注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2. 微孔板處理：

   取出所需數量的微孔板，將不用的微孔板放回原錫箔袋中，與提供的干燥劑一起重新密封，并保存于2～8°C。切勿冷凍。

3. 洗滌液準備：

   洗滌液在使用前也需回溫至室溫。

   
   

二、實驗過程

1. 加樣與加標：

   編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。

   加樣：加入標準品/樣本100μL到對應的微孔中，然后加伊維菌素抗試劑50μL/孔，輕輕振蕩混勻。

2. 反應與溫浴：

   使用蓋板膜將微孔板蓋好，置于25°C避光環境中反應30min。

   注意溫浴時間應遵守試劑盒規定，以保證反應充分進行。

3. 洗滌：

   小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩干，用洗滌液250μL/孔，充分洗滌4～5次，每次間隔10s。

   用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。

4. 顯色：

   加入底物液A液50μL/孔，再加底物液B液50μL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25°C避光環境中反應15min。

   底物是光敏感的，要在臨用前現配。

5. 測定：

   加入終止液50μL/孔，輕輕振蕩混勻。

   設定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測），測定每孔OD值（若無酶標儀，則不加終止液用目測法可進行判定）。

   測定應在加入終止液后的5min內完成，以保證數據準確性。

   
   

三、注意事項歸納

1. 溫度控制：確保試劑和樣本在檢測前達到室溫，溫浴時間嚴格遵守試劑盒規定。

2. 洗滌：洗滌步驟是實驗的關鍵，確保洗滌徹底，減少非特異性吸附。

3. 底物處理：底物需臨用前現配，并避免長時間暴露于光下。

4. 加樣準確性：注意加樣量的準確性，盡量使用量程和需要量接近的移液槍，減少誤差。

5. 平行實驗：建議進行雙孔平行實驗，以提高數據的準確性。

6. 結果判定：若利用試劑盒專業分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準確、快速分析。

   
   

遵循以上注意事項，可以確保伊維菌素含量檢測的準確性和可靠性。