概要?
乳鐵蛋(dan)白(bai)(lactoferrin，LF)是(shi)(shi)乳汁(zhi)中一種(zhong)重要的非血紅素鐵結合(he)糖蛋(dan)白(bai)，中性粒(li)細(xi)胞(bao)顆粒(li)中具(ju)(ju)有殺(sha)菌(jun)活性的單體糖蛋(dan)白(bai)。 乳鐵蛋(dan)白(bai)不僅參與鐵的轉(zhuan)運，而且具(ju)(ju)有廣譜抗(kang)(kang)菌(jun)、抗(kang)(kang)氧(yang)化、抗(kang)(kang) 癌(ai)、調節免疫(yi)系(xi)統等強大生物功能，被認為是(shi)(shi)一種(zhong)新型抗(kang)(kang)菌(jun)、 抗(kang)(kang)癌(ai)藥物和極具(ju)(ju)開發(fa)潛力的食品和飼料添(tian)加劑。?
本試劑盒是應用(yong) ELISA 技術研發的新一代牛乳鐵蛋白檢測產(chan)品，操(cao)作(zuo)時間需 45min，能減少操(cao)作(zuo)誤(wu)差和工作(zuo)強(qiang)度。?
實驗原理?
牛(niu)(niu)乳(ru)(ru)鐵(tie)(tie)(tie)蛋(dan)(dan)白ELISA檢測試(shi)劑盒采用雙抗(kang)體(ti)(ti)夾心(xin) ELISA 方法，在酶(mei)標(biao)(biao)微孔上預包(bao)被牛(niu)(niu)乳(ru)(ru)鐵(tie)(tie)(tie)蛋(dan)(dan)白抗(kang)體(ti)(ti)，預包(bao)被的(de)(de)牛(niu)(niu)乳(ru)(ru)鐵(tie)(tie)(tie)蛋(dan)(dan)白抗(kang)體(ti)(ti)與(yu)(yu)酶(mei)標(biao)(biao)抗(kang)體(ti)(ti) （酶(mei)標(biao)(biao)物）同時(shi)與(yu)(yu)樣本(ben)中的(de)(de)牛(niu)(niu)乳(ru)(ru)鐵(tie)(tie)(tie)蛋(dan)(dan)白結(jie)合(he)，形成抗(kang)體(ti)(ti)—牛(niu)(niu)乳(ru)(ru)鐵(tie)(tie)(tie)蛋(dan)(dan)白—酶(mei)標(biao)(biao)抗(kang)體(ti)(ti)復合(he)物，經 TMB 底(di)物顯(xian)色，樣本(ben)吸(xi)光值與(yu)(yu)牛(niu)(niu)乳(ru)(ru)鐵(tie)(tie)(tie)蛋(dan)(dan)白的(de)(de)含(han)量(liang)呈正相關(guan)，與(yu)(yu)標(biao)(biao)準曲線比較再乘以其對應的(de)(de)稀(xi)釋倍數，即可得(de)出(chu)樣本(ben)中牛(niu)(niu)乳(ru)(ru)鐵(tie)(tie)(tie)蛋(dan)(dan)白的(de)(de)含(han)量(liang)。?
適用范圍?
牛乳鐵(tie)蛋(dan)白ELISA檢(jian)(jian)測(ce)試劑盒可定性、定量(liang)檢(jian)(jian)測(ce)奶粉樣本中牛乳鐵(tie)蛋(dan)白的含(han)量(liang)。
貯藏條件及有效期?
貯(zhu)藏條件(jian)：保存試(shi)劑盒于 2～8℃。?
有(you)效(xiao)期：該產品有(you)效(xiao)期為 12 個月。
1、將所需試劑(ji)從冷藏環境(jing)中取出，置于室(shi)溫(wen)（20～25℃）平 衡 1 小時或 37℃溫(wen)箱平衡 30min 以上，注意(yi)每種(zhong)液體試劑(ji) 使用前均須完全溶(rong)解搖勻。
2、取出(chu)需要數量的微(wei)(wei)孔板，將(jiang)不(bu)用的微(wei)(wei)孔板放進原錫箔袋中 并(bing)且與提供的干燥劑一起重新密封，保存于 2～8℃。切勿 冷凍。?
3、洗滌(di)工作液在使用前也需回溫。
4、編(bian)號：將(jiang)樣本(ben)(ben)和(he)標準品(pin)對應微孔(kong)(kong)按序編(bian)號，每個樣本(ben)(ben)和(he)標 準品(pin)做(zuo) 2 孔(kong)(kong)平行，并記錄標準孔(kong)(kong)和(he)樣本(ben)(ben)孔(kong)(kong)所在(zai)的位置。
5、加標(biao)準品(pin)/樣本(ben)：加牛(niu)乳鐵蛋白酶標(biao)物 50μL/孔(kong)到對應的微(wei) 孔(kong)中，再(zai)加入標(biao)準品(pin)或(huo)樣本(ben) 50μL/孔(kong)。輕輕振(zhen)蕩混(hun)勻，用(yong) 蓋板膜蓋板后置 37℃避光環境(jing)中反應 15min。?
6、洗板：小(xiao)心揭開蓋板膜，將孔(kong)內液體甩干(gan)，用洗滌液 250μL/ 孔(kong)，充分洗滌 4~5 次，每次間隔 10s，用吸水(shui)紙(zhi)拍干(gan)（拍 干(gan)后未(wei)被清除的(de)氣泡(pao)可用未(wei)使用過的(de)槍頭(tou)戳破）。
7、顯(xian)色(se)：加(jia)(jia)入(ru)底物(wu)液(ye)(ye) A 液(ye)(ye) 50μL/孔，再加(jia)(jia)入(ru)底物(wu)液(ye)(ye) B 液(ye)(ye) 50μL/ 孔，輕輕振蕩(dang)混(hun)勻，用蓋板膜(mo)蓋板后置(zhi) 37℃避光環境中反 應 10min。?
8、測(ce)定：加入終止液 50μL/孔(kong)，輕輕振蕩混(hun)勻，設定酶標儀 于 450nm 處（建議用雙波長(chang) 450/630nm 檢測(ce)，請在 5min 內讀完數據），測(ce)定每孔(kong) OD 值。
